熒光定量PCR儀分析PCR技術(shù)又稱聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)，是一種在體外擴(kuò)增核酸的技術(shù)。該技術(shù)模擬體內(nèi)天然DNA的復(fù)制過(guò)程。其基本原理是在模板、引物、4種dNTP和賴熱DNA聚合酶存在的條件下，特異擴(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA區(qū)段的酶促合成反應(yīng)。每一循環(huán)包括高溫變性、低溫退火、中溫延伸三步反應(yīng)。每一循環(huán)的產(chǎn)物作為下一個(gè)循環(huán)的模板，如此循環(huán)30次，介于兩個(gè)引物之間的新生DNA片段理論上達(dá)到230拷貝。PCR技術(shù)的特異性取決于引物與模板結(jié)合的特異性。
　　高溫DNA聚合酶是以單鏈DNA或RNA為模板，在dNTP和一些陽(yáng)離子的存在情況下，在特定的引物指導(dǎo)下按3'-5'方向合成DNA.包括3種類(lèi)型：
　　1.5'-3'方向的DNA合成能力,沒(méi)有3'-5'方向的外切酶特性.如Taq及其突變體.這類(lèi)酶的合成能力強(qiáng),因?yàn)樗患m正合成中出現(xiàn)的突變；
　　2.與1類(lèi)似,有合成活性,沒(méi)有3-5的外切活性.但他們能以RNA為模板,合成DNA.如Tth DNA聚合酶；
　　3.有DNA聚合活性,沒(méi)有逆轉(zhuǎn)錄活性,但有3-5方向的外切酶活性。但是這些聚合酶的產(chǎn)量比Taq DNA聚合酶低。
　　將Taq DNA聚合酶同帶有3'到5'外切核酸酶活性第二種聚合酶混合在一起可以獲得比單獨(dú)Taq DNA聚合酶高的忠實(shí)性，并可以得到高產(chǎn)量及擴(kuò)增長(zhǎng)模板。
　　熒光定量PCR儀解釋除了酶，高濃度的dNTP或鎂離子會(huì)降低忠實(shí)性。將dNTP的濃度從200μM降低到25-50μM可以增加度如果四種核苷的濃度不同，忠實(shí)性會(huì)受影響。進(jìn)行較少的PCR循環(huán)也會(huì)有助于增加忠實(shí)性，因?yàn)樵黾友h(huán)數(shù)目和產(chǎn)物長(zhǎng)度就會(huì)增加突變可能性。