1）將細(xì)胞以1×106接種于60mm培養(yǎng)板，80％匯合后轉(zhuǎn)染，或者按照計(jì)劃的方案處理。

 

2）24小時(shí)后在新鮮培養(yǎng)液中加入適當(dāng)?shù)目股兀ㄕ婧吮磉_(dá)載體上的抗性標(biāo)記）進(jìn)行培養(yǎng)（該步可選）。

 

3）48－72小時(shí)后用胰酶消化（或者用細(xì)胞刮子）收集細(xì)胞，PBS（加入FBS使終濃度為1-3%）洗兩遍，棄上清，加入1ml70％預(yù)冷乙醇中，吹打均勻，-20℃或4℃固定12小時(shí)以上。

 

4）PBS（加入FBS使終濃度為1-3%）洗滌去乙醇，1000rpm,5min，洗兩遍。

 

5）0.5mlPBS重懸細(xì)胞，加入PI和RNaseA至終濃度50?g/ml，37℃（或室溫下）溫浴30min。

 

6）用BD C6流式細(xì)胞儀測(cè)定周期。

 

PI：碘化丙啶，以PBS配成1mg/ml，4℃保存。

 

RNaseA：10mg/ml

 

應(yīng)用：通過(guò)流式細(xì)胞儀分析各時(shí)期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，可檢測(cè)細(xì)胞的增殖、凋亡。